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漲知識~常見的熒光染料，收藏起來了！
免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique)，用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法；這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù)，是標記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。
它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。
因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結(jié)合，用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質(zhì)結(jié)合，用于檢測或定位抗體，但是在實際工作中熒光抗原技術(shù)很少應(yīng)用，所以人們習(xí)慣將免疫熒光技術(shù)又稱為熒光抗體技術(shù)，以熒光抗體方法較常用。
用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細胞(或組織)化學(xué)技術(shù)。
熒光探針
熒光探針是指在紫外-可見-近紅外區(qū)有特征熒光，并且其熒光性質(zhì)(激發(fā)和發(fā)射波長、強度、壽命、偏振等)可隨所處環(huán)境的性質(zhì)，如極性、折射率、粘度等改變而靈敏地改變的一類熒光性分子。
與核酸(DNA或RNA)、蛋白質(zhì)或其他大分子結(jié)構(gòu)非共價相互作用而使一種或幾種熒光性質(zhì)發(fā)生改變的小分子物質(zhì)。可用于研究大分子物質(zhì)的性質(zhì)和行為。
目前常用的熒光探針有熒光素類探針、無機離子熒光探針、熒光量子點、分子信標等。熒光探針除應(yīng)用于核酸和蛋白質(zhì)的定量分析外，在核酸染色、DNA電泳、核酸分子雜交、定量PCR技術(shù)以及DNA測序上都有著廣泛的應(yīng)用。我們以后主要討論熒光素類探針。
熒光標記的單克隆抗體技術(shù)為流式細胞儀在研究細胞膜和細胞內(nèi)各種功能性抗原、腫瘤基因蛋白等領(lǐng)域擴展了無限的應(yīng)用空間。熒光探針可以通過蛋白質(zhì)交聯(lián)劑共價結(jié)合在單克隆抗體上。
免疫熒光標記最常用的染料有異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)、藻紅蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。
熒光染料在核酸檢測中的應(yīng)用
核酸熒光染料對細胞核染色后定量測量細胞所發(fā)出的熒光強度，就可以確定細胞核中DNA、RNA的含量，并可以對細胞周期和細胞的增殖狀況進行分析。有多種熒光染料可以對細胞中的DNA或RNA染色，常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等，RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。
既然熒光染料有這么廣泛的應(yīng)用，那或許會有小伙伴想要對自己想研究的對象進行熒光偶聯(lián)了吧？
熒光偶聯(lián)
比如Abbkine LinKine™偶聯(lián)標記試劑盒，我們可以在抗體、蛋白質(zhì)、多肽或者其它生物分子上直接標記FITC、Cy3、AbFluor™熒光染料以滿足科研應(yīng)用、藥物研發(fā)以及診斷試劑盒開發(fā)的需求?？蓪σ豢惯M行直標，無需二抗，免去繁瑣的孵育和洗滌步驟，節(jié)省時間。
操作簡便，穩(wěn)定高效，標記后的抗體可以兼容ELISA、免疫組化、免疫熒光等各類免疫學(xué)應(yīng)用。
AbFluor™熒光染料
AbFluor™是一系列高度水溶性熒光染料，具有不同熒光染料核心結(jié)構(gòu)，覆蓋從UV到NIR的熒光光譜，相比于其它染料有許多新穎功能，并且是一種高亮度且耐光的熒光染料，是Cy3，Alexa Fluor，F(xiàn)ITC，TRITC，Dylight，IRDye的絕佳替代品，可直接用于偶聯(lián)實驗。
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